Skirtumas tarp imunofluorescencijos ir imunohistochemijos

Pagrindinis skirtumas - imunofluorescencija prieš imunohistochemiją
 

Ligos diagnostika, kuriai naudojami molekuliniai biologiniai metodai, tapo nauja klinikinės laboratorijos technologijos sritimi. Tai apima visus tyrimus ir metodus, siekiant nustatyti ligą ir suprasti ligos priežastį, analizuojant DNR, RNR ar organizme ekspresuotus baltymus. Sparti molekulinės diagnostikos pažanga leido atlikti pagrindinius užkrečiamųjų ir neužkrečiamųjų ligų tyrimus. Jie naudojami siekiant nustatyti svarbiausių genų ar baltymų, susijusių su liga, sekos ar išraiškos lygio pokyčius. Imunofluorescencija (IF) ir imunohistochemija (IHC) yra dvi tokios plačiai naudojamos vėžio biologijoje technologijos. IF yra IHC tipas, kai monokloniniams ir polikloniniams antikūnams analizuoti naudojamas fluorescencinis aptikimo metodas, o IHC naudoja cheminiais metodais nustatytus monokloninius ir polikloninius antikūnus. Tai yra pagrindinis skirtumas tarp IF ir IHC.

TURINYS

1. Apžvalga ir svarbiausias skirtumas
2. Kas yra imunofluorescencija 
3. Kas yra imunohistochemija
4. Imunofluorescencijos ir imunohistochemijos panašumai
5. Šalutinis palyginimas - lentelės formos imunofluorescencija ir imunohistochemija
6. Santrauka

Kas yra imunofluorescencija (IF)?

Imunofluorescencija yra aptikimo technika, kai tyrime naudojami antikūnai yra paženklinami, naudojant aptikimo fluorescencinius dažus arba fluorescencinius baltymus. Pažymėti antriniai antikūnai gali sukelti nepageidaujamus foninius signalus; todėl IF metodika grindžiama paties pirminio antikūno ženklinimu šiuo metu, kad aptikimo metu būtų išvengta nepageidaujamų signalų. Taikant šią metodą, išvengiama nespecifinio jungimosi tarp pirminio ir antrinio antikūnų ir jis yra greitesnis, nes nėra jokio antrinio inkubavimo etapo. Taip pat pagerėja duomenų kokybė.

01 paveikslas: Dvigubas imunofluorescencinis dažymas BrdU, NeuN ir GFAP

Fluorromai arba fluorescenciniai dažai yra junginiai, galintys absorbuoti radiaciją, geriausia ultravioletinė spinduliuotė, kuri jaudina. Kai dalelės iš sužadintos būsenos pasiekia pagrindinę būseną, jos skleidžia spinduliuotę, kurią fiksuoja ir aptinka detektorius, sudarydamas spektrą. Labai svarbu, kad fluorescencinė etiketė būtų suderinama ir stabili tam tikrai reakcijai ir kad ji būtų tinkamai konjuguota su antikūnu, kad būtų gauti tikslūs rezultatai. Vienas iš dažniausiai naudojamų fluorochromų yra žalios spalvos fluoresceino izotiocianatas (FITC), kurio absorbcijos ir išmetamųjų bangų ilgiai yra atitinkamai 490 nm ir 520 nm. Rodaminas, kitas IF naudojamas agentas, yra raudonos spalvos ir pasižymi skirtingais absorbcijos ir spinduliuotės bangų ilgiais - 553 nm ir 627 nm..

Kas yra imunohistochemija (IHC)?

IHC yra molekulinio tyrimo metodas, praktikuojamas siekiant nustatyti ir patvirtinti antigeno buvimą tikslinėje ląstelėje. Tikslinė ląstelė gali būti užkrečiama dalelė, mikrobų patogenas arba piktybinė naviko ląstelė. IHC naudoja monokloninius ir polikloninius antikūnus, kad nustatytų antigenų, esančių taikinių ląstelių paviršiuje, buvimą. Metodas pagrįstas antigeno ir antikūnų surišimu. Aptikimo žymeklis yra konjuguotas su šiais antikūnais, kad būtų galima nustatyti konkretaus antigeno buvimą ar nebuvimą. Šie žymekliai gali būti cheminiai žymenys, tokie kaip fermentai, ant fluorescencinių antikūnų arba radijo bangomis pažymėti antikūnai.

02 paveikslas: Pelės ir smegenų pjūvis, dažytas imunohistochemija

Populiariausias IHC taikymas yra vėžio ląstelių biologijoje, siekiant nustatyti piktybinius navikus, tačiau jis taip pat naudojamas infekcinėms ligoms nustatyti.

Kokie yra imunofluorescencijos ir imunohistochemijos panašumai?

• Imunofluorescencija ir imunohistochemija vyksta in vitro sąlygomis.
• Abi metodikos yra pagrįstos antigeno antikūnais
• Abu metodai yra labai greiti.
• Metodų rezultatai yra pakartojami.
• Abu pagerino duomenų kokybę.
• Šie metodai naudojami vėžio ir infekcinių ligų diagnostikoje.

Kuo skiriasi imunofluorescencija ir imunohistochemija?

Imunofluorescencija prieš imunohistochemiją
IF yra aptikimo metodas, kai tyrime naudojami antikūnai yra žymimi naudojant fluorescencinius dažus arba fluorescencinius baltymus aptikimui.	IHC yra aptikimo metodas, kai tyrime naudojami antikūnai yra paženklinami naudojant aptikimo chemines medžiagas ar radioaktyvius elementus.
Tikslumas
IF tikslumas yra didesnis nei IHC.	IHC tikslumas yra mažesnis.
Specifiškumas
IF yra konkretesnis.	IHC yra mažiau specifinis.

Santrauka - imunofluorescencija prieš imunohistochemiją

Molekuliniai mechanizmai atnešė daug pokyčių medicinos srityje, todėl atsirado pažangesnių molekulinių tyrimų metodų, kurie sukėlė revoliucijas diagnostikos srityje. Šie išradimai leido greitai ir tiksliai identifikuoti ir patvirtinti ligą, tokiu būdu sudarydami sąlygas sėkmingai administruoti ir gaminti vaistus. Šie metodai taip pat naudojami farmakologijoje siekiant surasti vaistų tikslus ir patvirtinti vaisto farmakokinetines savybes metabolizmo metu. IF ir IHC yra du diagnostiniai metodai, pagrįsti antigeno ir antikūnų surišimo samprata, nors abiejų metodų aptikimo būdas skiriasi. IF naudoja fluorescencijos principą antigenui aptikti, o IHC naudoja cheminio konjugacijos sąvoką antigenui aptikti. Tai yra skirtumas tarp IF ir IHC.

Atsisiųskite imunofluorescencijos ir imunohistochemijos PDF versiją

Galite atsisiųsti šio straipsnio PDF versiją ir naudoti ją neprisijungus, kaip nurodyta citatos pastaboje. Atsisiųskite PDF versiją čia. Skirtumas tarp imunofluorescencijos ir imunohistochemijos.

Nuorodos:

1. Aoki, Valéria ir kt. „Tiesioginė ir netiesioginė imunofluorescencija“. „Anais Brasileiros de Dermatologia“, „SociedadeBrasileira de Dermatologia“, galite rasti čia. Priimta 2017 m. Rugpjūčio 25 d.
2. Duraiyan, Jeyapradha ir kt. „Imunohistochemijos pritaikymai“. „Farmacijos ir biologinių mokslų žurnalas“, „Medknow Publications & Media Pvt Ltd“, 2012 m. Rugpjūtis, galima rasti čia. Priimta 2017 m. Rugpjūčio 25 d.

Vaizdo mandagumas:

1. „Dvigubas imunofluorescencinis dažymas BrdU, NeuN ir GFAP“. Autorius: Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, X ventiliatorius, Xu G, Frey WH 2nd, Liu X. - Transnacionalinio augimo faktoriaus įvedimas į nosį. beta1 pelėms po insulto sumažina infarkto tūrį ir padidina neurogenezę subventrikulinėje zonoje; PMID 19077183 (CC BY 2.0) per „Commons Wikimedia“
2. „Pelės audinio hipotalamas, dažytas ABC imunohistochemija“, pateikė zabbn - Savas darbas (CC BY-SA 3.0) per „Commons Wikimedia“