Skirtumas tarp šiaurės pietų ir vakarų pūtimo

Pagrindinis skirtumas - šiaurinis ir pietinis, palyginti su vakarų pūtimu
 

Specifinių DNR, RNR ir baltymų sekų aptikimas yra būtinas atliekant įvairius molekulinės biologijos tyrimus. Gelio elektroforezė yra metodas, kuris atskiria DNR, RNR ir baltymus pagal jų dydį. Pagal gelio profilius tam tikra DNR seka, RNR seka arba baltymas aptinkami specialiais metodais, vadinamaisiais blotinais ir hibridizavimu su pažymėtais zondais. Yra trys skirtingi tipų metodas, būtent pietinis, šiaurinis ir vakarinis. Pagrindinis skirtumas tarp šiaurinio pietinio ir vakarinio blotėjimo priklauso nuo molekulės, kurią ji nustato iš mėginio, rūšies. Southern blotinimas yra metodas, kurio metu iš DNR mėginio nustatoma specifinė DNR seka. Šiaurinis blotinimas yra metodas, kuriuo iš RNR mėginio nustatoma specifinė RNR seka. Western blotting yra metodas, kuriuo iš baltymo mėginio nustatomas specifinis baltymas.

TURINYS
1. Apžvalga ir svarbiausias skirtumas
2. Kas yra pietų pūtimas
3. Kas yra Šiaurės pūtimas
4. Kas yra Vakarų pūtimas
5. Lyginimas iš šono - šiaurės ir pietų vs vakarų pūtimas
6. Santrauka

Kas yra Pietų pūtimas?

Southern blotting metodą sukūrė E. M. Southern 1975 m., Kad būtų galima nustatyti specifinę DNR seką iš DNR mėginio. Tai yra pirmasis molekulinės biologijos diegimo metodas. Tai leido aptikti specifinius genus iš DNR, specifinius fragmentus iš DNR ir tt. Pietvakarių blotinimo technika yra keletas žingsnių. Jie yra tokie.

1. Iš mėginio išskiriama DNR ir suardoma restrikcijos endonukleazėmis.
2. Suskaidytas mėginys atskiriamas agarozės gelio elektroforeze.
3. DNR fragmentai gelyje denatūruojami į pavienes gijas naudojant šarminį tirpalą.
4. Vienos grandinės DNR perpilama į nitroceliuliozės filtro membraną kapiliarų pagalba.
5. Perkelta DNR visam laikui pritvirtinama prie membranos.
6. Fiksuota DNR ant membranos yra hibridizuota su pažymėtais zondais.
7. Nesurišta DNR nuplaunama iš membranos.
8. Rentgeno filmas yra veikiamas membrana ir paruošiamas autoradiografas.

Pietų blotinimas taikomas įvairiems molekulinės biologijos aspektams. Tai naudinga atliekant RFLP žemėlapių sudarymą, kriminalistinius tyrimus, DNR metilinimą genų ekspresijai, mutavusių genų nustatymą esant genetiniams sutrikimams, DNR pirštų atspaudus ir kt..

01 paveikslas: Pietų blotinimo technika

Kas yra Šiaurės pūtimas?

Šiaurinis blotinimas yra metodas, skirtas specifinei RNR sekai arba mRNR sekai iš mėginio aptikti, norint ištirti genų ekspresiją. Šį metodą sukūrė Alwine'as, Kempas ir Starkas 1979 m. Jis skiriasi nuo papildomo ir vakarinio blotinimo metodų dėl kelių žingsnių. Tačiau ši technika taip pat atliekama naudojant elektroforezę geliu, blotinimą ir hibridizaciją naudojant specifinius paženklintus zondus ir aptikimą. Šiaurinio balinimo metodas atliekamas taip.

1. RNR ekstrahuojama iš mėginio ir atskiriama elektroforeze geliu.
2. RNR iš gelio perpilama į pūtimo membraną ir fiksuojama.
3. Membrana yra apdorojama pažymėtu zondu, paruoštu iš cDNR arba RNR (zondas papildo specifinę seką mėginyje)..
4. Zondas inkubuojamas su membrana, kad surištų su tam tikra seka.
5. Nesurišti zondai nuplaunami.
6. Hibridizuoti fragmentai aptinkami autoradiografu.

Šiaurinis blotinimas yra svarbi priemonė hibridizuotos mRNR aptikimui ir kiekybiniam įvertinimui, RNR skilimo tyrimui, RNR pusinės eliminacijos laiko įvertinimui, RNR splaisingo nustatymui, genų ekspresijos tyrimui ir kt..

02 paveikslas: Šiaurės pūtimas

Kas yra Vakarų blotingas?

Western blotting yra specifinio baltymo iš baltymų mišinio nustatymo metodas, naudojant paženklintus antikūnus. Todėl Western blot taip pat žinomas kaip imunoblotas. Šią techniką pristatė Towbinas et al 1979 m., ir dabar jis reguliariai atliekamas baltymų analizės laboratorijose. Žingsniai yra šie.

1. Baltymai ekstrahuojami iš mėginio
2. Baltymai atskiriami pagal jų dydį, naudojant poliakrilamido gelio elektroforezę
3. Atskirtos molekulės elektroporacijos būdu perkeliamos į PVDF membraną arba nitroceliuliozės membraną
4. Membranos blokuojamos, kad nespecifiškai prisijungtų prie antikūnų
5. Perduoti baltymai yra surišti su pirminiu antikūnu (fermentais pažymėti antikūnai).
6. Membrana plaunama siekiant pašalinti nespecifiškai surištus pirminius antikūnus
7. Susieti antikūnai aptinkami pridedant substratą ir nustatant susidariusias spalvotas nuosėdas

Western blot yra naudingas nustatant anti-ŽIV antikūnus žmogaus serumo mėginyje. Western blot taip pat gali būti naudojamas kaip patvirtinamasis hepatito B infekcijos testas ir galutinis pamišusių karvių ligos testas.

03 paveikslas: Vakarų balinimas

Kuo skiriasi šiaurinis pietų ir vakarų pūtimas?

Šiaurinis vs pietų vs vakarinis pūtimas
Aptiktos molekulės tipas
Šiaurės pūtimas	Šiaurinis blotinimas nustato specifinę RNR seką iš RNR mėginio.
Pietų pūtimas	Southern blotinimas nustato specifinę DNR seką iš DNR mėginio.
Vakarų balinimas	Western blotting aptinka specifinį baltymą iš baltymo mėginio.
Gelio rūšis
Šiaurės pūtimas	Tam naudojamas agarozės / formaldehido gelis.
Pietų pūtimas	Tam naudojamas agarozės gelis.
Vakarų balinimas	Tam naudojamas poliakrilamido gelis.
Blotinimo metodas
Šiaurės pūtimas	Tai yra kapiliarinis perkėlimas.
Pietų pūtimas	Tai yra kapiliarinis perkėlimas.
Vakarų balinimas	Tai yra elektrinis perdavimas.
Naudojami zondai
Šiaurės pūtimas	cDNR arba RNR zondai, paženklinti radioaktyviai arba neradioaktyviai.
Pietų pūtimas	DNR zondai yra žymimi radioaktyviai arba neradioaktyviai.
Vakarų balinimas	Pirminiai antikūnai naudojami kaip zondai.
Aptikimo sistema
Šiaurės pūtimas	Tai atliekama naudojant autoradiografą arba nustatant šviesos ar spalvos pokyčius.
Pietų pūtimas	Tai atliekama naudojant autoradiografą, nustatant šviesą ar spalvos pokyčius.
Vakarų balinimas	Tai atliekama naudojant šviesos ar spalvos pokyčių aptikimą.

Santrauka - šiaurės ir pietų vs vakarų užkrėtimas

Blotinimas yra speciali technika, sukurta specifinėms DNR, RNR ar baltymams identifikuoti iš mėginių. Tam, kad būtų galima aptikti tam tikro tipo molekules, yra trys atskiros balinimo procedūros, būtent šiaurinė, pietinė ir vakarinė. Šiaurinio bloto metodas yra skirtas aptikti specifinę RNR seką iš RNR mišinio. Southern blotting metodas leidžia aptikti specifinę DNR seką iš DNR mėginio, o Western blotting metodas yra sukurtas specifiniam baltymui iš baltymų mišinio atpažinti..

Nuorodos
1. Gibbonai, Janay. „Western Blot: baltymų perdavimo apžvalga“. Šiaurės Amerikos medicinos mokslų žurnalas. „Medknow Publications & Media Pvt Ltd“, 2014 m. Kovo mėn. Žiniatinklis. 2017 m. Kovo 27 d
2. Brownas, T. „Pietų pūtimas“. Dabartiniai imunologijos protokolai. JAV nacionalinė medicinos biblioteka, 2001 m. Gegužė. Internetas. 2017 m. Kovo 27 d
3. Jis, Shan L., „Šiaurės dėmė“. Enzimologijos metodai. JAV Nacionalinė medicinos biblioteka, 2013. Žiniatinklis. 2017 m. Kovo 27 d

Vaizdo mandagumas:
1. „Northern Blot Scheme“, autorius RNA405 - Nuosavas darbas (viešas domenas) per „Commons Wikimedia“
2. „Western blot 114A“, autorius Amanthabagdon - Nuosavas darbas (viešas domenas) per „Commons Wikimedia“