T4 ir T7 DNR ligazės skirtumas

Pagrindinis skirtumas - T4 ir T7 DNR ligazė
 

DNR ligazė yra svarbus fermentas, naudojamas molekulinės biologijos technikose. Jis veikia kaip molekuliniai klijai, skirti prisijungti prie nukleotidų, formuojant fosfodiesterinius ryšius tarp nukleotidų. Fosfodiesteriniai ryšiai susidaro tarp cukraus dalies 3 'hidroksilo galo ir 5' galo fosfato grupės. DNR ligazė yra gyvybiškai svarbi replikacijos procese, norint prisijungti prie atsilikusios grandinės Okazaki fragmentų ir atliekant DNR taisymo mechanizmus bei in vitro klonavimo eksperimentai, siekiant prisijungti prie norimo dominančio geno į vektoriaus genomą. Šiuo metu molekuliniai biologai naudoja dvi pagrindines DNR ligas: T4 ir T7 DNR ligas. T4 DNR ligazė yra vienas iš pirmųjų fermentų, išskiriamų iš T4 bakteriofago. T7 DNR ligazė, kuri yra mažesnis baltymas, yra fermentas, išskirtas iš T7 bakteriofago. Tai yra pagrindinis skirtumas tarp T4 ir T7 DNR ligasų.

TURINYS

1. Apžvalga ir svarbiausias skirtumas
2. Koks yra DNR ligazės veiksmas
3. Kas yra T4 DNR ligazė
4. Kas yra T7 DNR ligazė
4. T4 ir T7 DNR ligazės panašumai
5. Šalutinis palyginimas - T4 ir T7 DNR ligazė lentelės pavidalu
6. Santrauka

Koks yra DNR ligazės veiksmas?

DNR sujungimas vyksta trijų pakopų reakcija. Pirmasis žingsnis yra nukleofilinis ATP alfa-fosforo išpuolis, sukuriantis kovalentinį fermento-adenilato tarpinį junginį, kuriame AMP yra prijungtas prie lizino galinės šoninės grandinės azoto. Antrame etape 5'-fosfato pasibaigusio DNR substrato fermento-adenilato fosforui išauga nukleofilinis priepuolis, atpalaiduojantis liziną ir susidarantis DNR-adenilatas. Paskutiniame etape DNR-adenilatas yra užpultas kitos DNR grandinės 3'-OH, atpalaiduodamas AMP ir prisijungdamas prie polinukleotidų..

Kas yra T4 DNR ligazė?

T4 ligazė buvo pirmoji ligazė, kurią išskyrė ir atpažino Meselsonas, Weigle'as ir Kellenbergeris, ir buvo pirmoji komercinė ligazė, pagaminta kada nors. T4 DNR ligazė yra nuo ATP priklausomas fermentas, katalizuojantis fosfodiesterinių ryšių formavimąsi. Tai yra viena polipeptido grandinė su 487 aminorūgščių liekanomis, jos molekulinė masė yra apie 77 kDa. Optimalus jo aktyvumo pH yra nuo 7,5 iki 8.

01 paveikslas: T4 DNR ligazė

T4 DNR ligazė, kaip rodo jo pavadinimas, yra bakteriofage T4 ir buvo izoliuota, kai fagas gamindamas fermentą užsikrėtė -E. coli. Fermentas ligatuoja dvigubus DNR dupleksus su neryškiais galais, o surišami fragmentai turi būti arti vienas kito.

Kas yra T7 DNR ligazė?

T7 ligazė yra 41 kDa baltymas, kurį gamina T7 bakteriofagas ir kuris yra išskiriamas užkrėtus E. coli ląstelės. Pagrindinė T7 ligazės funkcija yra sujungti DNR dupleksus per fosfodiesterinius ryšius ir sujungti šalia esančius DNR fragmentus atliekant klonavimo eksperimentus. Optimalus T7 DNR ligazės pH yra 7,0–7,2. T7 ligazė priklauso nuo ATP. T7 DNR jungtys taip pat yra pajėgios atkaitinti DNR ir RNR hibridus, transkripcijos metu sukeldamos nenormalią konformaciją; tačiau šis reiškinys vis dar tiriamas in vitro studijos.

Kokie yra T4 ir T7 DNR ligazės panašumai?

• T4 ir T7 DNR ligazė dalyvauja jungimosi reakcijoje, atkaitindama DNR dupleksus, sudarydama fosfodiesterinius ryšius tarp DNR fragmento 3 'OH ir 5' fosfato galo..
• Abu fermentai jungiasi neryškiais DNR dupleksais, kurie yra arti vienas kito.
• Abu fermentai priklauso nuo ATP.
• Šie fermentai yra išskirti užkrėtus E. coli ląstelės su konkrečiu bakteriofagu.
• Abiejų fermentų panaudojimas apima:
  • Molekulinis klonavimas - susieti dominantį geną į vektorių
  • DNR taisymas - norint atstatyti dvigubas stygas
  • In vitro DNR replikacija
  • Ligazės grandininė reakcija

Kuo skiriasi T4 ir T7 DNR ligazės?

T4 vs T7 DNR ligazė
T4 DNR ligazės tipo DNR ligazė, išskirta iš bakteriofago T4 ir dalyvauja rišant gretimus DNR fragmentus per fosfodiesterinių ryšių formavimąsi.	T7 DNR ligazės tipo DNR ligazė, išskirta iš bakteriofago T7 ir dalyvauja rišant gretimus DNR fragmentus per fosfodiesterinių ryšių formavimąsi.
Baltymo dydis
T4 DNR ligazės dydis yra 77 kDa - didesnis nei T7 DNR ligazės.	T7 DNR ligazės dydis yra 41 kDa.
Optimalus pH
T4 DNR ligazę veikiantis pH diapazonas yra 7,5 - 8,0.	T7 DNR ligazės veikiantis pH diapazonas yra 7,0–7,2.

Santrauka - T4 ir T7 DNR ligazė

DNR ligatai yra svarbi fermentų, dalyvaujančių molekuliniame klonavime, klasė, norint gaminti rekombinantines DNR molekules, kuriose yra dominantis genas. Ligacijos reakcija yra energiją sunaudojanti reakcija, todėl vykdomi nauji mokslinių tyrimų tyrimai, siekiant pagerinti tikslumą moduliuojant turimas ligas. T4 ir T7 DNR ligatai yra dviejų rūšių svarbūs DNR ligazės fermentai, naudojami molekuliniuose biologiniuose metoduose. T7 DNR ligazė taip pat yra tyrimų, kurių pagrindas buvo pirminė ligazė, išskirta iš užkrėstų T4, rezultatas E. coli. Dėl mažesnio dydžio T7 vaizduojamas didesnis efektyvumas ir tikslumas atliekant savo funkciją. Tai yra skirtumas tarp T4 ir T7 ligazės.

Atsisiųskite „T4 vs T7 DNA Ligase“ PDF versiją

Galite atsisiųsti šio straipsnio PDF versiją ir naudoti ją neprisijungę prie nuorodų. Atsisiųskite PDF versiją čia. Skirtumas tarp T4 ir T7 Ligase.

Nuorodos:

1. „DNR ligazė, T4“. „DNA Ligase“, T4 - Worthingtono fermento vadovas, kurį galite rasti čia. Prisijungta 2017 m. Rugpjūčio 22 d.
2. Doherty, Aidan J. ir kt. „Bakteriofago T7 DNR ligazės perteklius, gryninimas, kristalizavimas ir apibūdinimas“. Biologinės chemijos žurnalas, 1996 m. Gegužės 10 d., Galima rasti čia. Prisijungta 2017 m. Rugpjūčio 22 d.

Vaizdo mandagumas:

1. „3 pav. Splint Aid, viengrandis mRNR-DNR T4 DNR ligazės sujungimas.“ (CC BY 3.0) per „Commons Wikimedia“