Skirtumas tarp šilto ir šalto tripsino

Pagrindinis skirtumas - šiltas vs Šalta Trypsinizacija

Šiltasis ir šaltasis tripsinizacija yra du metodai, naudojami fermentiniam ląstelių skaidymui auginant gyvūnų ląsteles. pagrindinis skirtumas tarp šilto ir šalto tripsino, kaip rodo pavadinimai, priklauso nuo temperatūros, kurioje tripsinas pridedamas ląstelėms suskaidyti. Šiltas tripsinizavimas vyksta aukštesnėje temperatūroje (36,5–37 ° C) ⁰C) kadangi šaltas tripsinizavimas vyksta žemos temperatūros sąlygomis.

Pirminio gyvūninių ląstelių auginimo procese naudojami trys pagrindiniai metodai, kurie pasiteisino. Trys metodai apima mechaninį ląstelių skaidymą, fermentinį ląstelių skaidymą ir pirminį eksplanto metodą. Fermentinis ląstelių suskaidymas, dėl kurio ląstelės išsiskiria, vyksta baltymus skaidančio fermento tripsino būdu. Todėl šis procesas žinomas kaip tripsinizacija. Trypsinizacija gali būti atliekama dviem skirtingais būdais: šiltoji tripsinizacija ir šaltoji tripsinizacija. Šiltas tripsinizavimas yra būdas ląstelėms apdoroti tripsinu šiltoje aplinkoje, esant 36,5–37 ° C temperatūrai ⁰C. Šaltasis tripsinų šalinimas yra apdorojimas tripsinu, vykstantis šaltesnėmis sąlygomis, geriausia leduose, palaikant labai žemą temperatūrą..

TURINYS

1. Apžvalga ir svarbiausias skirtumas
2. Kas yra šilta tripsinizacija
3. Kas yra šaltoji tripsinizacija
4. Šilto ir šalto tripsino panašumai
5. Šalutinis palyginimas - šilta ir šalta tripsino lentelės forma
6. Santrauka

Kas yra šilta tripsinizacija?

Trypsinizavimas gali būti atliekamas norint išskaidyti ląstelinius komponentus, kad būtų galima išskirti ląsteles ir gauti pirminę ląstelių kultūrą. Tripsinas yra baltymų skilimo fermentas, o fermento mišinyje naudojamas fermentų mišinys gali būti žalias ekstraktas arba išgrynintas produktas. Teigiama, kad neapdorotas ekstraktas yra veiksmingesnis baltymų lizės ir ląstelių dezintegracijos procese, nes jame yra kitų ardančių fermentų..

Šiltas tripsinizavimas yra dažniausiai naudojamas fermentinis ląstelių skaidymo metodas, vykstantis aukštesnės temperatūros sąlygomis. Prieš apdorojant tripsinu, norimas audinys supjaustomas į mažesnius gabalėlius. Tai palengvina lengvą išskaidymo procesą. Tada susmulkintas audinys plaunamas specialioje terpėje, vadinamoje bazinės druskos dissekcijos terpe.

Baigę plovimą, ląstelės virsta kolba, kurioje yra aktyvusis fermentas, kuris yra tripsinas. Kadangi ši technika reiškia šiltą tripsinizacijos protokolą, tripsino temperatūra yra maždaug 37 ° C ⁰C maždaug keturias valandas.

01 paveikslas: tripsinas

Turinys sumaišomas ir sumaišomas naudojant centrifugavimo metodus, kad būtų lengviau sudaryti protokolą ir pagreitinti skaidymą. Pasiekus rekomenduojamą laiką, ląstelės gali būti gaunamos iš supernatanto. Tada ląstelės, gautos iš supernatanto, inkubuojamos tam tikroje temperatūroje ir tam tikru metu.

Kas yra šaltoji tripsinizacija?

Šaltasis tripsinizavimas yra kitas tripsino tipas, vykstantis šaltuoju metų laiku. Taikant šį metodą, susmulkintos ir nuplautos ląstelės dedamos į buteliukus ant ledo ir po to mirkomos tripsinu. Mirkymo laikotarpis yra daug ilgesnis - apie 6 - 24 valandas.

Užbaigus mirkymą, tripsinas pašalinamas iš ląstelių lizato, o audinio gabalėliai toliau inkubuojami 37 ° C temperatūroje.⁰C maždaug 20 - 30 minučių. Ląstelės suskaidomos pakartotinai pilant audinių mišinį. Tai leis ląstelėms atskirti nuo membranos ir patekti į supernatantą. Kai ląstelės yra supernatante, jos inkubuojamos ir auginamos norimoje temperatūroje ir tam tikru laikotarpiu.

Šaltojo tripsino metodas turi keletą privalumų

Didesnis gyvybingų ląstelių derlius, nes sumažėja ląstelių pažeidimas. Ląstelių pažeidimas sumažinamas nenaudojant centrifugavimo.
Labai patogus metodas.
Mažiau varginantis.

Pagrindinis šaltojo tripsino metodo apribojimas yra tas, kad vienu kartu negalima naudoti didelių kiekių.

Kokie yra šilto ir šalto tripsino panašumai?

Šiltasis ir šaltasis tripsinizacijos procesai ląstelių skaidymui naudoja fermentą tripsiną.
Ląstelių auginimo procedūrose ląstelėms skaidyti naudojami ir šilti, ir šalti.
Atliekant šiltojo ir šaltojo tripsino gydymo procedūras, ląstelės gaunamos iš supernatanto.

Kuo skiriasi šiltas ir šaltas tripsinas??

Šiltas ir šaltas tripsinizavimas
Šiltas tripsinizavimas yra būdas ląstelėms apdoroti tripsinu šiltoje aplinkoje, esant 36,5–37 ° C temperatūrai ⁰.	Šaltasis tripsinizavimas yra apdorojimas tripsinu, vykstantis šaltesnėmis sąlygomis, geriausia esant ledui, palaikant labai žemą temperatūrą.
Protokolas
Susmulkintų audinių gabalėliai palaikomi 37 ° C temperatūroje ⁰C visą procedūrą.	Išpjaustyti audinio gabalai iš pradžių palaikomi šaltoje temperatūroje, o po to palaikomi 37 ° C ⁰.
Temperatūra
Šiltas tripsinizavimas vyksta 36,5–37 ° C temperatūroje ⁰	Šalta tripsinizacija vyksta esant šaltam ledui.
Sunaudotas laikas
Mažiau laiko reikia visam šiltojo tripsino proceso procesui (maždaug 4 valandoms).	Ilgesnis laikas (maždaug 6 - 24 valandos) šaltajam tripsinui atlikti.
Gyvų ląstelių išeiga
Mažai šilta tripsinizacija.	Aukštas šaltas tripsino kiekis.
Centrifugavimas
Centrifugavimas reikalingas ląstelių išskaidymui šiltoje tripsinizacijoje.	Centrifuguoti nereikia šaltojo tripsino metu.
Pradinis audinių kiekis tripsinui nustatyti
Šiltesnei tripsinui gali būti panaudotas didesnis audinių kiekis.	Šaltesnėje tripsino gamyboje gali būti naudojamas mažesnis audinių kiekis.
Ląstelių pažeidimas
Didelis dėl centrifugavimo šiltoje tripsinizacijoje.	Mažiau dėl šalto tripsino.

Santrauka - Šiltas vs Šalta Trypsinizacija

Tripsinas yra baltymus skaidančio fermento tripsino panaudojimo būdas pirminių ląstelių kultūrų skaidymui ir paruošimui ląstelių auginimo proceso metu. Yra du pagrindiniai tripsino metodai, pagrįsti procedūros metu naudojama temperatūra. Jie yra šilti ir šalti tripsinu. Šiltas tripsinizavimas atliekamas 37 ° C temperatūroje ⁰C kadangi šaltasis tripsinizavimas atliekamas esant šaltam ledui. Nors šaltasis tripsinizavimas užtrunka ilgiau, teigiama, kad didesnis gyvybingų ląstelių derlius. Taip yra todėl, kad šalto tripsino metu ląstelių pažeidimai yra kuo mažesni, nes jie nenaudoja energingų centrifugavimo žingsnių. Tai yra skirtumas tarp šilto ir šalto tripsino.

Nuoroda:

1. „Trypsinizacija“. Trypsinizacija - apžvalga | „ScienceDirect“ temos. Galima rasti čia
2. „Pirminė ląstelių kultūra: 3 būdai (su schema).“ Biologijos diskusija, 2015 m. Spalio 16 d. Galima rasti čia

Vaizdo mandagumas:

1. „Išbandyk aktyvią svetainę“ „Fydardel“ - savo darbas, (CC BY-SA 3.0) per „Commons Wikimedia“

Mokslas ir gamta