Skirtumas tarp klonavimo ir subklonavimo

Pagrindinis skirtumas - klonavimas prieš subklonavimą
 

Klonavimas ir subklonavimas yra molekulinės biologinės procedūros, kurios sukuria genetiškai identiškas ląsteles ar organizmus, turinčius dominančią DNR ar geną. Klonavimas yra metodas, kuris apima dominančio geno ar DNR įterpimą į vektorių, jo replikaciją bakterijoje-šeimininke ir ląstelių ar organizmų, kurie yra tiksli genetinės struktūros kopijos, gamybą. Subklonavimas yra technika, apimanti norimo geno, kuris jau yra įterptas į vektorių, įterpimą į antrinį vektorių, jo replikaciją bakterijoje-šeimininke ir genetiškai identiškų ląstelių ar organizmų kopijų gaminimą. Pagrindinis klonavimo ir subklonavimo skirtumas yra tas, klonuojant, dominantis genas, sujungtas į vektorių, tęsia klonavimo procesą, tuo tarpu subklonuojant jau klonuotas dominantis genas yra atskirtas nuo pirminio vektoriaus ir vėl įterpiamas į vektorių-recipientą ir tęsiamas procesas.

TURINYS
1. Apžvalga ir svarbiausias skirtumas
2. Kas yra klonavimas
3. Kas yra subklonavimas
4. Šalutinis palyginimas - klonavimas ir subklonavimas
5. Santrauka

Kas yra klonavimas?

Klonavimas yra procedūra, kurios metu gaunami genetiškai identiški organizmai ar ląstelės. Gamtoje klonavimas vyksta nelytinio dauginimosi būdu. Kai nėra genetinės rekombinacijos ar pakitimų, dukterinės ląstelės gauna tą pačią motinos genetinę struktūrą. Prokariotiniai ir eukariotiniai organizmai sukuria klonus dvejetainio dalijimosi, pumpurų susidarymo, mitozės ir kt. Būdu. Molekulinėje biologijoje klonavimo genai ar specifiniai DNR fragmentai yra populiarus metodas tiriant to konkretaus DNR skyriaus struktūrą ir funkcijas..

Pagrindinis molekulinio klonavimo tikslas yra padaryti milijonus genetiškai tapačių ląstelių ar organizmų, turinčių dominantį DNR fragmentą (daugiausia genų), kopijų. Tai sukuria organizmus su tiksliomis genetinėmis kito kopijomis. Pirmiausia, specifiniai genai yra klonuojami atliekant molekulinius tyrimus, siekiant gauti struktūrinę ir funkcinę informaciją ir nustatyti DNR seką. Taip pat plačiai naudojamas klonavimas specifinių baltymų ar didelių produktų gamybai.

Klonavimo procedūra

Pagrindiniai klonavimo procedūros žingsniai yra šie.

1. Dominančio geno identifikavimas ir išskyrimas. (Dominančio geno amplifikacija PGR metodu).
2. Apribotas dominančio geno skaidymas (restrikcijos endonukleazė geną supjausto).
3. Apribotas vektoriaus DNR virškinimas. (Vektorinė DNR taip pat supjaustoma naudojant tą pačią restrikcijos endonukleazę).
4. Geno įterpimas į vektorių ir rekombinantinės molekulės formavimas.
5. Rekombinantinio vektoriaus transformacija į bakteriją šeimininkę.
6. Transformuotų bakterijų išskyrimas ir identifikavimas (plazmidės vektoriuje turėtų būti pasirenkamas genas, dažniausiai atsparumo antibiotikams genas, kad būtų patikrintos transformuotos bakterijos).
7. Rekombinantinė geno ekspresija šeimininko viduje.

Paveikslėlis01: Klonavimo procedūra

Kas yra subklonavimas?

Subklonavimas yra norimo geno perkėlimo iš vieno vektoriaus į kitą vektorių procedūra, norint pamatyti geno išraišką, kad būtų galima gauti norimą geno funkcionalumą. Šiame metode naudojami du vektoriai; būtent pradinis vektorius ir paskirties vektorius. Klonuoti intarpai vėl perkeliami į antrą vektorių subklonuojant. Geno perkėlimo iš pirmojo vektoriaus į antrąjį vektorių tikslas yra gauti tai, ko negalėjo padaryti pirmasis vektorius, arba vėl atskirti geną jau klonuoto DNR fragmento viduje ir jį ekspresuoti atskirai. Šios procedūros pradžioje naudojami restrikcijos fermentai.

Subklonavimo procedūra

Pagrindiniai subklonavimo žingsniai yra šie.

1. Pasitelkiant restrikcijos endonukleazes, DNR atskyrimas donoro plazmidėje (pirminis vektorius).
2. Dominančios DNR amplifikacija naudojant PGR.
3. PGR produkto (dominančios DNR) gryninimas geliniu elektroforeze.
4. Plazmidės-recipiento atidarymas tomis pačiomis restrikcijos endonukleazėmis, naudojamomis dominančiai DNR atskirti pradinėje plazmidėje.
5. Susidomėjimas dominančia DNR (genu) į recipiento plazmidę, kad būtų sukurta subklonuota plazmidė.
6. Subklonuoto vektoriaus transformacija į kompetentingą šeimininko bakteriją.
7. Transformuotų ląstelių atranka.
8. Plazmidės DNR gryninimas ir panaudojimas DNR sekai nustatyti arba genų ekspresijai gauti norimiems produktams gauti.

Subklonavimas atliekamas tais atvejais, kai vieną geną išskiria iš klonuotų genų grupės arba kai reikia dominantį geną perkelti į naudingą plazmidę, kad būtų galima pamatyti tikslią dominančio geno funkciją..

Pav. 02: subklonavimo procedūra

Kuo skiriasi klonavimas nuo subklonavimo?

Klonavimas prieš subklonavimą
Klonavimas yra procedūra, kurios metu gaunami genetiškai identiški organizmai ar ląstelės.	Subklonavimas yra norimo geno perkėlimo iš vieno vektoriaus į kitą vektorių procedūra, norint pamatyti geno išraišką, kad būtų galima gauti norimą geno funkcionalumą..
Procesas
Atskirkite dominančią DNR nuo organizmo ir vieną kartą įterpkite į vektorių ir klonuokite	Jau klonuota DNR yra atskirta nuo pirmojo vektoriaus, įterpiama į antrą vektorių ir klonuojama.
Įterpkite judesį per vektorius
Nejuda intarpų (dominančios DNR) iš vieno vektoriaus į kitą.	Perkelkite intarpus iš pirminio vektoriaus į paskirties vektorių.

Santrauka - klonavimas ir subklonavimas

Klonavimas sukuria genetiškai identiškas ląsteles ar organizmus su įterptu genu ar DNR. Tai vyksta atskiriant ir įterpiant dominančią DNR į vektorių ir ekspresiją bakterijoje-šeimininke. Subklonavimas panašus į klonavimo veiksmus. Tačiau subklonuojant jau klonuotas DNR fragmentas (dominantis genas) įterpiamas į vektorių ir paverčiamas bakterija šeimininke. Tai yra pagrindinis skirtumas tarp klonavimo ir subklonavimo.

Nuorodos

1. Lodish, Harvey. „DNR klonavimas plazmidžių vektoriais“. Molekulinių ląstelių biologija. 4-asis leidimas. JAV nacionalinė medicinos biblioteka, 1970 m. Sausio 1 d. Žiniatinklis. 2017 m. Kovo 5 d
2. „Subkloningas“. Vikipedija. „Wikimedia Foundation“, 2017 m. Vasario 14 d. Žiniatinklis. 2017 m. Kovo 6 d
3. „Subkloningas“. Subklonavimas | Atviros prieigos straipsniai Atvirosios prieigos žurnalai | Konferencijos pranešimai | Redaktoriai | Autoriai | Recenzentai | mokslo renginiai. N.p., n.d. Žiniatinklis. 2017 m. Kovo 6 d
4. Wackerhage, Henning. „Kaip subklonuoti“. Kaip subklonuoti. N. P., 1970 m. Sausio 1 d. Žiniatinklis. 2017 m. Kovo 6 d

Vaizdo mandagumas

1. Molekulinio klonavimo procedūra - CNX OpenStax [CC BY 4.0], per Wikimedia Commons
2. Subklonavimo procedūra - originalus įkėlėjas buvo Takometras angliškoje Vikipedijoje (perkelta iš en.wikipedia į Commons.) [CC BY 2.5] per Wikimedia Commons