Skirtumas tarp GFP ir EGFP

pagrindinis skirtumas tarp GFP ir EGFP yra tai, kad GFP yra laukinio tipo baltymas, įtrauktas į ne žinduolių ląstelių molekulinį klonavimą, o EGFP yra patobulintas arba inžineriniu būdu pagamintas GFP, kuris gali būti naudojamas žinduolių ląstelėse.

Molekulinis klonavimas yra pažangi technika, kurią mokslininkai nepaprastai naudoja išreikšdami baltymus rekombinantine technologija. Naudojant rekombinantinę DNR technologiją, rekombinantinį vektorių būtina sėkmingai transformuoti į organizmą-šeimininką. Taigi, transformacijos proceso metu turėtų būti nustatyta ir patvirtinta, ar dominantis genas buvo transformuotas į šeimininką, ar ne. Norėdami tai įvertinti, molekuliniai biologai taiko keletą metodų. Iš tų metodų vienas yra reporterio genas. Šie reporterio genai veikia kaip pasirenkami žymekliai teisingiems transformantams parinkti. Taigi, žali fluorescenciniai baltymai (GFP) ir sustiprinti žali fluorescenciniai baltymai (EGFP) yra du baltymai reporteriuose, naudojami molekuliniame klonavime..

TURINYS

1. Apžvalga ir svarbiausias skirtumas
2. Kas yra GFP?
3. Kas yra EGFP?
4. GFP ir EGFP panašumai
5. Šalutinis palyginimas - lentelės forma GFP ir EGFP
6. Santrauka

Kas yra GFP?

GFP yra laukinio tipo baltymas, kuriame yra 238 aminorūgščių liekanos ir keletas pasirinktų aminorūgščių sekų sričių, išskiriančių ją iš kitų fluorescencinių baltymų. Be to, šis laukinio tipo baltymas iš pradžių buvo izoliuotas nuo Aequorea Victoria; medūzos rūšis. Tačiau dėl natūralių reiškinių medūzos, reaguodamos į tam tikrus dirgiklius, galėjo gauti žalios spalvos fluorescenciją.

Anksčiau ši koncepcija nustebino mokslininkus, ir jie nusprendė ją naudoti savo rekombinantinės DNR technologijose. Todėl mokslininkai naudojo šią laukinio tipo geno mutantinę formą kaip reporterio geną atlikdami genų ekspresijos tyrimus. Laukinio tipo GFP genas yra pajėgus gaminti baltymą, kuris kambario temperatūroje arba UV šviesoje suteikia fluorescenciją. Todėl, įterptas į transformantus, jis išreiškia ir sukuria fluorescenciją. Jei fluorescencija atsiranda po transformacijos proceso, tai patvirtina transformacijos proceso sėkmę. Paprasčiau tariant, fluorescencinė emisija rodo sėkmingą vektoriaus, kuris neša dominantį geną, transformaciją į šeimininką.

01 paveikslas: GFP

Dėl šios priežasties GFP veikia kaip in vivo genų ekspresijos žymeklis. Šiuo metu GFP gaminti naudojami genetinės inžinerijos metodai. Taip pat yra daugybė patobulintų GFP versijų, tokių kaip EGFP. Taigi tai leidžia efektyviai panaudoti GFP atliekant molekulinį klonavimą ir genų ekspresijos tyrimus.

Kas yra EGFP??

Patobulintas žalias fluorescencinis baltymas arba EGFP yra patobulinta GFP versija. Paprastais žodžiais tariant, EGFP galime apibrėžti kaip laukinio tipo GFP inžinerijos variantą. Kai mutavosi laukinio tipo GFP genas, jis sukelia teigiamą poveikį. Taigi, mutavęs GFP genas leidžia išreikšti naujus ženklus, todėl galime sukurti patobulintą GFP su patobulintomis savybėmis. Be to, mes galime sėkmingai įdiegti mutacijas laukinio tipo GFP gene, naudodami švitinimo ar cheminius metodus. Šie mutavę genai sukuria EGFP, kuris pasižymi daugiau naudingų savybių.

02 paveikslas: EGFP

Patobulintos EGFP charakteristikos yra šios;

• Geba skleisti stipresnius fluorescencinius signalus.
• Turi didelį jautrumą.
• Gali naudoti jį žinduolių ląstelėse vietoje prokariotų ir kitų žemesnio lygio eukariotų.
• Taip pat padidina produkto grynumą.

Todėl, palyginti su GFP, geno ekspresijos tyrimams pirmenybė teikiama EGFP. Tačiau produktas yra brangesnis, palyginti su GFP.

Kokie yra GFP ir EGFP panašumai?

• GFP ir EGFP yra du baltymai, galintys skleisti žalią spalvą
• Todėl abu veikia kaip baltymai reporteriai genų ekspresijos tyrimuose.
• Taip pat įmanoma sintetinti abu naudojant rekombinantinės DNR technologiją.
• Be to, nesunku toliau mutuoti šiuos du tipus, kad susintetintumėte patobulintas formas.

Kuo skiriasi GFP ir EGFP??

Žurnalisto genas yra genas, kuris prisijungia prie dominančio rekombinantinės DNR technologijos geno. Tai rodo sėkmingą rekombinantinio vektoriaus virsmą šeimininku. Čia GFP ir EGFP yra dviejų rūšių žali fluorescenciniai baltymai, kurie veikia kaip reporterio baltymai. Tačiau pagrindinis skirtumas tarp GFP ir EGFP yra tas, kad GFP yra laukinio tipo, o EGFP yra inžinerinė GFP versija. Be to, EGFP turi daugiau naudingų savybių nei GFP. Pavyzdžiui, EGFP skleidžia stipresnę fluorescencinę šviesą ir yra jautresnis nei GFP. Kitas skirtumas tarp GFP ir EGFP yra sistemos, kuriose mes galime jas naudoti. Ne žinduolių sistemos naudoja GFP, o žinduolių sistemos naudoja EGFP.

Žemiau pateiktoje infografijoje lentelių pavidalu pateikiamas skirtumas tarp GFP ir EGFP.

Santrauka - GFP ir EGFP

GFP ir EGFP yra baltymai reporteriuose atliekant molekulinio klonavimo ir genų ekspresijos tyrimus. GFP yra laukinio tipo baltymas, kuris yra žaliai fluorescencinis baltymas. Iš pradžių baltymai buvo atskirti nuo medūzų Aequorea victoria. Priešingai, EFGP yra sustiprinta GFP baltymo forma. Tai yra laukinio tipo mutantas, pasižymintis patobulintomis savybėmis. Taigi EFGP turi didesnį signalo stiprumą ir didesnį jautrumą. Todėl galime naudoti jį žinduolių pernešėjams. Priešingai, GFP daugiausia naudojamas tik su ne žinduolių pernešėjais. Apskritai, tai yra skirtumas tarp GFP ir EGFP.

Nuoroda:

1.Cinelli, R. A. ir kt. „Patobulintas žalias fluorescencinis baltymas kaip baltymo dinamikos ir lokalizacijos analizės įrankis: vietinės fluorescencijos tyrimas vienmolekulės lygiu“. Fotochemija ir fotobiologija., JAV Nacionalinė medicinos biblioteka, 2000 m. Birželio mėn. Galima rasti čia  
2. „PDB101: Mėnesio molekulė: žalias fluorescencinis baltymas (GFP).“ RCSB: PDB-101. Galima rasti čia

Vaizdo mandagumas:

1. „GFP fluorescenciniai baltymų filmai“, autorius Erin Rod - savo kūrinys, (CC BY-SA 4.0) per „Commons Wikimedia“ 
2. „CA2 amigo2 eGFP pele“, autorius Dudekas, Serena; Kuruana, Douglasas; „Carstens“, Kelly - nuosavas darbas, (CC BY-SA 3.0) per „Commons Wikimedia“