Skirtumas tarp PGR ir realaus laiko PGR

PGR vs realaus laiko PGR

PGR arba polimerazės grandininė reakcija yra revoliucinis atradimas šiuolaikinėje molekulinėje biologijoje, kurią pirmą kartą sukūrė chemikas Kary Mullis 1983 m. Tai leidžia analizuoti amplifikuoti vieną sudėtingoje DNR seką. Pagrindinė PGR idėja yra ta, kad du pradmenys, kurie papildo priešingas DNR sekos grandines, yra nukreipti vienas į kitą; pradmenys sukuria papildomas gijas, kurių kiekvienoje yra kitas gruntas. Taigi rezultatas yra didelis kiekis sekos, atitinkančios DNR, esančią tarp dviejų pradmenų. DNR polimerazės fermentas naudojamas pradmenims pailginti PGR. DNR polimerazė yra termiškai stabilus fermentas, turintis savybę išgyventi aukštoje temperatūroje (nuo 94 iki 95 ° C), naudojamą šabloninės DNR denatūracijai..

PGR apima tris etapus, būtent, pakartotinius denatūravimo ciklus, pradmenų atkaitinimą ir DNR sintezę. Šiai reakcijai atlikti naudojamas termocikleris, kuris gali būti užprogramuotas greitai ir tiksliai keisti temperatūrą. PGR yra baudžiamasis tyrimas, DNR pirštų atspaudai, patogenų nustatymas ir ankstyvųjų žmonių rūšių DNR analizė.

Kas yra įprasta PGR?

Yra trys pagrindinės įprastinio PGR stadijos: DNR amplifikacijos etapas, PGR atskyrimas ir produktų aptikimas. DNR segmentai paprastai atsiskiriami agarozės gelio elektroforeze. Tada produktai dažomi eteiduim bromidu. Galiausiai aptikimas pasiekiamas vizualizuojant juostas ant gelių UV šviesoje. Todėl galutiniai įprastinės PGR rezultatai nėra išreikšti skaičiais. Paprastai įprasta PGR gali aptikti tik vieną parametrą.

Kas yra realaus laiko PGR?

Realaus laiko PGR gali aptikti produktų amplifikaciją, nes produktai yra sintezuojami. Tobulėjant technologijai, PGR tapo labai populiariu metodu, ypač nustatant ir identifikuojant bakterijas maisto produktuose. Realaus laiko PGR naudojama fluorescencinių dažų sistema ir termocikleris su fluorescencinio aptikimo galimybe..

Kuo skiriasi įprastas PGR ir realaus laiko PGR?

• Įprastinis PGR reikalauja daugiau laiko, nes amplifikuotų PGR produktų analizei atlikti naudojama gelinė elektroforezė. Realaus laiko PGR, priešingai, užima mažiau laiko, nes jis gali aptikti amplifikaciją ankstyvosiose reakcijos fazėse.

• Realaus laiko PGR renka duomenis eksponentiniame PGR augimo etape, o tradicinė PGR renka duomenis reakcijos pabaigos taške..

• Įprasto PGR galutiniai rezultatai gali būti ne visai tikslūs, tačiau realiojo laiko PGR rezultatai yra labai tikslūs.

• Realiojo laiko PGR yra jautresnė nei įprasta PGR.

• Įprasto PGR skiriamoji geba yra labai prasta, tuo tarpu PGR realiu laiku gali nustatyti labai mažai pokyčių dėl aukštos skiriamosios gebos.

• Įprastinio PGR galutinio taško aptikimas turi trumpą dinaminį diapazoną, o realaus laiko PGR aptikimas turi platų dinaminį diapazoną.

• Skirtingai nuo įprasto PGR, automatinio aptikimo metodai randami realiojo laiko PGR.

• Įprastinis PGR yra labai sudėtingas ir reikalaujantis daug darbo, nei realiojo laiko PGR.

• Skirtingai nuo realaus laiko PGR, įprastas PGR negali atskirti negyvų ir gyvų bakterijų.

• Realaus laiko PGR naudoja fluorescencinę dažų sistemą produktams aptikti, o įprasta PGR naudoja etidžio bromidą ir UV šviesą, kad vizualizuotų juostas agarozės gelio terpėje..