Skirtumas tarp SDS puslapio ir „Western Blot“

Pagrindinis skirtumas - SDS puslapis prieš „Western Blot“
 

Western blotting yra metodas, kuriuo iš baltymo mėginio nustatomas specifinis baltymas. Ši technika atliekama keliais pagrindiniais etapais: elektroforezė geliu, blotinimas ir hibridizavimas. Natrio dodecilsulfato poliakrilamido gelio elektroforezė (SDS puslapis) yra tam tikra gelio elektroforezės metodika, naudojama baltymams atskirti pagal jų dydį (molekulinį svorį). „Western blot“ yra specialus pūtimo membranos lapas, naudojamas perduodant tą patį baltymų modelį SDS puslapyje. Pagrindinis skirtumas tarp SDS puslapio ir „Western blot“ yra tas SDS puslapis leidžia atskirti baltymus mišinyje kol Western blot leidžia aptikti ir kiekybiškai įvertinti konkretų baltymą iš mišinio. Abu yra naudingi atliekant baltymų analizės tyrimus.

TURINYS
1. Apžvalga ir svarbiausias skirtumas
2. Kas yra SDS puslapis
3. Kas yra „Western Blot“
4. Šalutinis palyginimas - SDS puslapis ir „Western Blot“
5. Santrauka

Kas yra SDS puslapis?

SDS puslapis yra gelinis elektroforezės metodas, naudojamas baltymų atskyrimui. Jis dažniausiai naudojamas biochemijoje, genetikoje, kriminalistikoje ir molekulinėje biologijoje. Kai baltymai ekstrahuojami iš mėginio, jie paleidžiami ant gelio, sudaryto iš SDS ir poliakrilamido. SDS yra anijoninis ploviklis, naudojamas baltymams (denatūruoti baltymams) linearizuoti ir neigiamam įkrovimui linearizuotiems baltymams proporcingas jų molekulinei masei. Poliakrilamidas tampa tvirta gelio atrama. Denatūruoti baltymai, kurie yra neigiamai įkrauti, per gelį migruoja link teigiamo aparato galo. Atsižvelgiant į baltymų dydį, baltymų migracijos greitis skiriasi ir vyksta atskyrimas. Todėl SDS puslapis yra naudingas atskiriant baltymus pagal jų dydį.

Poliakrilamido gelio, skirto baltymams frakcionuoti, paruošimas yra svarbus SDS žingsnis. Tinkama poliakrilamido koncentracija ir naudojamo kryžminio junginio rūšis stipriai veikia gelio fizines savybes, todėl faktinis skirtingų baltymų atskyrimas. Kad gelis būtų veiksmingai atskirtas, reikia tinkamai valdyti gelio porų dydžius. Tačiau SDS puslapis laikomas aukštos skiriamosios gebos baltymų atskyrimo technika.

SDS puslapio technika turi esminį baltymų analizės apribojimą. Kadangi SDS denatūruoja baltymus prieš atskyrimą, tai neleidžia nustatyti fermentinio aktyvumo, baltymų jungimosi sąveikos, baltymų kofaktorių ir kt..

01 paveikslas: SDS puslapis

Kas yra „Western Blot“?

Western blotting metodas leidžia aptikti specifinį baltymą iš baltymų mišinio ir išmatuoti baltymo kiekį bei molekulinę masę. „Western blot“ yra membrana, naudojama blotinimo metu, norint gauti veidrodinį baltymų modelio vaizdą SDS-poliakrilamido gelyje. Membraną, kuri naudojama vakariniam blotinimui, daugiausia sudaro nitroceliuliozė arba polivinilideno difluoridas (PVDF). Membrana su perduotu baltymu gali būti naudojama norimam baltymui identifikuoti. Norint nustatyti norimą baltymą hibridizacijos būdu, reikalingas aukštos kokybės antikūnas. Antikūnas jungiasi su specifiniu antigenu ir atskleidžia norimo antigeno, kuris yra baltymas, buvimą.

Baltymai iš SDS poliakrilamido gelio perkeliami į Western blot tirpalą elektroblotuojant. Tai efektyvus ir greitas metodas, kurio metu baltymai elektroforezuojasi iš gelio ir patenka į nitroceliuliozės membraną (Western blot)..

02 paveikslas: „Western Blot“

Kuo skiriasi SDS puslapis nuo „Western Blot“?

SDS puslapis prieš „Western Blot“
SDS puslapis yra gelinio elektroforezės metodas.	„Western blot“ yra metodas, kuris atliekamas membranoje, kad būtų galima aptikti specifinį baltymą iš mišinio.
Naudokite
SDS puslapis leidžia atskirti baltymus pagal jų dydį.	„Western blot“ leidžia pernešti baltymus į SDS puslapio gelį, nekeisdamas jo modelio ir leidžia hibridizuotis su specifiniais antikūnais.
Trūkumai
Baltymų denatūracija, brangios išlaidos ir neurotoksinų chemikalų buvimas yra šios technologijos trūkumai.	Ši technika reikalauja daug laiko, todėl jai reikalingos geros asmeninės ir specifinės kontroliuojamos sąlygos.

Santrauka - SDS puslapis prieš „Western Blot“

SDS puslapis ir Western blot yra du baltymų analizės metodai. SDS puslapis leidžia lengvai atskirti baltymus ant gelio pagal jų molekulinę masę. „Western blot“ padeda patvirtinti specifinio baltymo buvimą ir kiekį hibridizacijos būdu su specifiniais antikūnais. Tai yra skirtumas tarp SDS puslapio ir „Western blot“.

Nuorodos:
1. Blancheris, C. ir A. Jonesas. „SDS-PAGE ir Western blotting metodai.“ Molekulinės medicinos metodai. JAV nacionalinė medicinos biblioteka, n.d. Žiniatinklis. 2017 m. Kovo 27 d
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig ir David H. Petering. „Natūralusis SDS-PAGE puslapis: Aukštos skiriamosios gebos elektroforezinis baltymų atskyrimas, išlaikant natūralias savybes, įskaitant surištus metalo jonus“. Metallomika: integruotas biometalinis mokslas. JAV nacionalinė medicinos biblioteka, 2014 m. Gegužė. Žiniatinklis. 2017 m. Kovo 27 d.

Vaizdo mandagumas:
1. „SDS-PAGE elektroforezė“ Autorius Bensaccount angliškoje Vikipedijoje (CC BY 3.0) per „Commons Wikimedia“
2. „Western blot 114A“, autorius Amanthabagdon - Nuosavas darbas (viešas domenas) per „Commons Wikimedia“