Terminai „stacking gel“ ir „eraldantis gelis“ naudojami aiškinant SDS-PAGE techniką. SDS-PAGE arba natrio dodecilsulfato-poliakrilamido gelio elektroforezė yra laboratorinė technika, naudojama baltymų molekulėms atskirti pagal jų molekulinį svorį. Metodo teorija yra ta, kad baltymai, turintys skirtingą molekulinį svorį, turi skirtingą migracijos greitį; mažos molekulinės masės molekulės migruoja greičiau, tuo tarpu didelės molekulinės masės molekulės migruoja lėtai. Migracijos terpė yra gelis. Yra du gelių tipai, vadinami krovimo geliu ir skiriančiuoju geliu. pagrindinis skirtumas tarp sudedančio gelio ir skiriamojo gelio yra tas kaupiamojo gelio pH yra 6,8, o skiriamojo gelio pH yra 8,8.
1. Apžvalga ir svarbiausias skirtumas
2. Kas yra „Stacking Gel“
3. Kas yra skiriamasis gelis
4. Ryšys tarp derinimo gelio ir atskirto gelio
5. Šalutinis palyginimas - sudedantis gelis ir atskyrimo gelis lentelės pavidalu
6. Santrauka
Stacking gel yra mažai koncentruotas poliakrilamido gelis, kuris dedamas ant koncentruoto skiriamojo gelio (skiriamojo gelio) viršaus SDS-PAGE metodu. Stacking gel yra naudojamas elektroforezės skyrai pagerinti. Skiriamoji geba padidėja dėl to, kad skiriasi stacking gelio ir skiriamojo gelio koncentracijos, darančios įtaką mėginio baltymams. Kadangi poliakrilamido koncentracija kaupiamajame gelyje yra maža, porų dydis yra didesnis. Tai taip pat padeda padidinti atskyrimą.
Pakavimo gelis yra laisvas poliakrilamido gelis su didelėmis, apie 7% poliakrilamido poromis. Šios poros nesudaro didelių kliūčių didelėms baltymų molekulėms. Taigi šis gelis šiek tiek veikia tų baltymų mobilumą. Tai leidžia atskirti atsižvelgiant į baltymų mobilumą ir dydį, koncentruojant juos į du gelius.
01 paveikslas: SDS-PAGE akrilamido gelis
Pakavimo gelio pH yra 6,8. Jo pH yra rūgštus nei gelio, skiriamo 2 pH vienetais, pH. Šis pH reiškia mažesnį jonų stiprį, taigi ir didesnę elektrinę varžą. Tai išprovokuoja baltymų mobilumą nei kitos gelyje esančios įkrautos dalelės.
SDS-PAGEtechnikos atskyrimo gelis arba skiriamasis gelis yra labai koncentruotas poliakrilamido gelis, dedamas ant mažai koncentruoto sudedančio gelio viršaus. Skiriamojo gelio sudėtyje yra didelis kiekis poliakrilamido (10%). Šio gelio pH palaikomas kaip 8 = 8,8, o tai yra aukštesnis nei pakraunančio gelio pH.
02 paveikslas: Gelio elektroforezės aparatas
Kai baltymų molekulės pasiekia skiriamąjį gelį, tų molekulių migracija sulėtėja, nes skiriamasis gelis yra didelės koncentracijos gelis, kurio poros yra mažos, o tai gali būti didelis barjeras baltymų molekulių judėjimui. Dėl šio sulėtėjimo kiti baltymai lėtai migruoja, kad pasivytų, todėl tarp dviejų gelių susidaro siaura, koncentruota juosta.
Stacking Gel vs Skiriamasis gelis | |
Stacking gel yra mažai koncentruotas poliakrilamido gelis, kuris dedamas ant koncentruoto skiriamojo gelio (skiriamojo gelio) viršaus SDS-PAGE metodu.. | SDS-PAGE metodą skiriantis gelis arba skiriamasis gelis yra labai koncentruotas poliakrilamido gelis, dedamas ant mažai koncentruoto sudedančio gelio viršaus.. |
Talpinimas | |
Padalijimo gelis dedamas ant skiriamojo gelio. | Atskiriamasis gelis dedamas ant indo, naudojamo gelio elektroforezei, dugno. |
Koncentracija | |
Stacking gel koncentracija yra aukšta. | Skiriamojo gelio koncentracija yra maža. |
Poliakrilamido kiekis | |
Pakavimo gelyje yra apie 7% poliakrilamido. | Atskiriamojo gelio sudėtyje yra apie 10% poliakrilamido. |
pH | |
Pakavimo gelio pH yra 6,8. | Skiriamojo gelio pH yra 8,8. |
Poros dydis | |
Stacking gel yra dideli porų dydžiai. | Atskiriamajame gelyje yra mažų porų dydžių. |
Rezoliucija | |
Padedantis gelis suteikia geresnę skiriamąją gebą. | Atskiriantis gelis suteikia prastą skiriamąją gebą. |
Stacking gel ir separating gel yra dviejų tipų poliakrilamido geliai, naudojami tam, kad būtų geriau atskirtos baltymų molekulės tam tikrame mėginyje. Skirtumas tarp sudedančio gelio ir skiriamojo gelio yra tas, kad sudedančio gelio pH yra 6,8, o skiriamojo gelio pH yra 8,8.
1. „Poliakrilamido gelio elektroforezė“. Poliakrilamido gelio elektroforezė (teorija): Molekulinės biologijos virtualioji laboratorija II: Biotechnologijos ir biomedicinos inžinerija: Amrita Vishwa Vidyapeetham Virtual Lab. Galima rasti čia
2. „Kaip veikia SDS-PAGE“. „Bitesize Bio“, 2018 m. Vasario 16 d. Galima rasti čia
3. „SDS-PAGE krovimo gelis - BICH 608 (Polymenis-Pettigrew).“ „Google“ svetainės. Galima rasti čia
1.'SDS-PAGE akrilamido gelis'By Bensaccount angliškoje Vikipedijoje (CC BY 3.0) per „Commons Wikimedia“
2. „Gelio elektroforezės aparatas“, pateikė Jeffrey M. Vinocur - Savas darbas, (CC-BY 2.5) per „Commons Wikimedia“